Test PrediScreen
Depuis 2007, la directive européenne REACH demande de développer des méthodes alternatives in vitro minimisant le recours à l’animal. Cette directive implique de caractériser rapidement et efficacement le potentiel cancérigène, et donc génotoxique, de milliers de composés, sans effectuer de test sur les animaux.
En accord avec cette directive, et dans le respect de la règle des 3Rs, le test de génotoxicité PrediScreen que nous avons développé et validé est un test de génotoxicité in vitro, réalisé sur des cellules humaines (savoir-faire licence INRAE). Ce test permet d’étudier le potentiel cancérigène de tout type de composé ou d’échantillon.
5 informations en 1 seul test
Comment ça marche ?
Le test innovant et prédictif PrediScreen est basé sur l’étude de la phosphorylation des deux biomarqueurs H2AX (γH2AX) et H3 (pH3).
L’histone H2AX est considérée comme un indicateur global de la génotoxicité d’un composé alors que l’histone H3 est un biomarqueur spécifique des composés aneugènes. L’utilisation combinée de ces deux biomarqueurs permet ainsi de différencier efficacement les molécules clastogènes des composés aneugènes, ainsi que les molécules cytotoxiques (voir référence, Khoury et al. 2016).
En parallèle, l’utilisation de lignées cellulaires humaines métaboliquement compétentes ou non, pour réaliser nos essais, ont le doubles avantages de nous permettre d’étudier la bioactivation métabolique de la molécule testée et de favoriser l’extrapolation des résultats obtenus à l’Homme.
Le test γH2AX a été étudié et validé grâce à la liste de composés préconisés par le Centre Européen pour la Validation des Méthodes Alternatives (ECVAM).
Test de cytotoxicité
Le test PrediScreen est réalisé avec la technique de l’In-Cell Western, ce qui permet d’étudier la cytotoxicité d’un composé en même temps que son effet génotoxique.
Cette mesure de viabilité a été démontré comme plus sensible que le test MTT classique.
Exemples d'application
Comparaison de résultats obtenus à partir de différents tests de génotoxicité
Compounds
Metabolic activation required
Mode of actiona
Ames assayb
MN assayc
PrediScreen assayd
Benzo[a]pyrene
Etoposide
Chlorothalonil
Taxol
Hydroquinone
Nocodazole
+
–
+
–
–
–
C
C
C
A
C/A
A
+
E
–
–
–
–
+
+
.
+
+
+
+
+
+
+
+
+
a Modes d’action : C = Clastogène ; A = Aneugène ; C/A = les deux
b Test d’Ames : test in vitro réalisé sur des bactéries
c Test du micronoyau : test in vitro réalisé sur des cellules HepG2
d Test PrediScreen : test in vitro réalisé sur des cellules HepG2
Exemples d'application
Comparaison de résultats obtenus à partir de différents tests de génotoxicité
Comparaison des effets clastogénique, aneugenique et cytotoxique avec le test PrediScreen, après 24h de traitement sur la lignée cellulaire humaine HepG2
La viabilité cellulaire est représentée par le pourcentage de nombre relatif de cellules (% RCC). Chaque valeur est représentée selon la moyenne ± l’erreur standard. Les différences sont observées en comparaison avec le contrôle négatif DMSO, avec une significativité (**p ≤ 0.01).
